용출 및 재생

크로마토그래피 매체가 고갈되면 용출해야 합니다. 기본 원리는 더 활성적인 이온 또는 그룹에 의해 표적 생성물을 탈착하는 것입니다. 다른 흡착제는 활성이 다릅니다. 따라서 단백질을 용출하기 위해 적합한 용출제를 선택해야 합니다.  크로마토그래피 매체 .

이온교환 크로마토그래피를 용출하는 방법은 대략 세 가지가 있습니다.
하나는 동시 용출을 위한 것입니다. 용출액은 희석된 산, 알칼리 또는 염 용액을 사용할 수 있으며 적절한 유기 용매도 사용할 수 있으며, 여기서 염 용액이 주로 사용되고, 목표 생성물과 최종 생성물의 특성에 따라 투여 형태가 선택됩니다. 흡수되는 물질이 종종 단일 종이 아니기 때문에 각 물질의 전하가 다르고 매질과의 결합 강도가 다릅니다. 동일한 용출액을 사용하더라도 쉽게 대체되는 물질이 먼저 매질에서 흘러나오고 결합력이 강합니다. 물질이 배출된 후 분획으로 수집하는 한 다양한 물질을 분리하여 비교적 순수한 생성물을 얻을 수 있습니다. 이 방법은 목표 생성물의 성능이 잘 이해될 때 분리하거나 분석 종을 분리하는 데 자주 사용됩니다.

두 번째는 단계적 용출, 즉 다양한 농도의 염 용액으로 용출하는 것입니다.분리 매체 교환 흡착 공정 동안 다양한 단백질이 흡착됩니다.일정한 용출 조건을 사용하는 경우 때때로 모든 성분을 제대로 분리할 수 없으며 용출 조건을 변경해야 합니다.단계적 변경이 될 수 있습니다.즉, 다양한 용출액 또는 다양한 pH 값을 가진 용출액을 단계적으로 용출에 사용하고 다양한 용출 피크를 다양한 용출액 농도와 다양한 산도에 따라 얻을 수 있습니다.즉, 염 농도는 표적 단백질을 얻을 수 있고, 다양한 염 농도는 다양한 표적 단백질을 얻을 수 있습니다.이 단계적 용출 방법은 알려진 성질의 단백질을 분리하는 데 적합하며, 특히 규모 생산에 적합하며 조작이 쉽고 제어하기 쉽습니다.

세 번째 유형은 연속적 기울기 용출, 즉 용출액의 이온 강도 또는 pH를 일정한 선형 변화에 따라 변경하는 것입니다(일반적으로 pH를 변경하는 용출 방법을 사용하는 특수한 경우에만 해당). 용출액 등급 과정에서 다양한 단백질을 하나씩 대체하여 다양한 단백질 구성 요소를 얻고 동시에 단백질은 일반적으로 꼬리가 없습니다. 기울기 용출은 이온 교환 크로마토그래피에서 가장 일반적으로 사용되는 용출 방법이며 용출 능력이 가장 강한 용출 방법이기도 하며 유사한 전하 특성을 가진 유사한 구성 요소의 용출에 적합합니다.

용출 공정에서는 병류 용출 또는 역류 용출을 사용할 수 있습니다. 병류 용출은 순방향 용출이라고도 하며, 즉 용출액의 흐름 방향이 작동 유체의 흐름 방향과 같고, 역류 용출은 역방향 용출이라고도 합니다. 역방향 용출의 경우 용출액의 흐름 방향은 작동 유체의 흐름 방향과 반대입니다. 공급 액체가 교환 컬럼을 통해 위에서 아래로 교환되고 흡착되면 교환 컬럼의 상층에 있는 흡착물 농도가 하층의 농도보다 높고 용출액이 아래에서 위로 역탈착되면 용출 목적을 보다 효율적으로 달성할 수 있습니다. 그러나 역방향 용출 작업은 순방향 용출보다 훨씬 복잡하기 때문에 대부분 양성 용출을 기반으로 합니다.

용출액의 유속은 이온교환 크로마토그래피의 분리에도 영향을 미치며 용출 속도는 일반적으로 일정하게 유지됩니다. 일반적으로 느린 용출의 분해능은 빠른 용출보다 좋지만 용출 속도가 너무 느려 분리 시간이 길어지고 샘플 확산, 스펙트럼 피크 확장, 분해능 감소와 같은 부작용이 발생하므로 실제 상황에 따라 다릅니다. 적절한 용출 속도를 선택하십시오. 용출 피크가 특정 영역에 비교적 집중되어 중복이 발생하는 경우 그래디언트 범위를 적절히 줄이거나 용출 속도를 낮추어 분해능을 높여야 합니다. 분해능은 좋지만 용출 피크가 너무 넓은 경우 용출 속도를 적절히 높여야 합니다.