완충액

pH는 이온교환 크로마토그래피의 작동에 있어서 중요한 요소이며, pH 안정화와 변화는 일반적으로 완충액을 사용하여 이루어지므로 완충액의 선택은 분리에 영향을 미치는 중요한 요소입니다.

버퍼를 선택할 때 pH와 이온 강도는 불순물로부터 타겟 생성물을 분리하는 것뿐만 아니라 생성물의 수율에도 영향을 미치는 두 가지 주요 요인입니다. 선택된 pH는 분리된 물질을 교환 가능한 이온으로 만들 뿐만 아니라 높은 활성을 유지하기 위해 타겟 생성물의 등전점, 안정성 및 용해도에 따라 달라집니다. 이온 교환기의 pK 값도 고려해야 합니다.

버퍼 자체가 충전되어 있으므로 다음과도 결합됩니다.  이온교환크로마토그래피매체 . 이 조합은 두 가지 종류의 간섭을 일으키며, 한편으로는 완충액의 농도를 감소시켜 완충 용량을 감소시키고, 다른 한편으로는 분리 매체와 교환되어 매체의 교환 용량을 위해 단백질과 경쟁합니다. 따라서 음이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용할 때는 인산염과 같은 음전하 완충액을 사용하지 마십시오. 양이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용할 때는 트리스와 같은 양전하 완충액을 사용하지 마십시오.

분리 매체의 종류가 다르기 때문에 초기 프로세스가 약간 다릅니다. 일반적으로 음이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용할 때 초기 완충액은 표적 단백질의 등전점보다 0.5-1 pH 높습니다. 양이온 교환층을 사용하면 매체를 분석할 때 시작 완충액은 표적 단백질의 등전점보다 0.5~1 pH 낮습니다.