니 세플라이프 ®6FF(NTA) 니켈 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피 수지

니켈 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피 수지

니 세플라이프 6FF (NTA)

니 세플라이프 ® 6FF (NTA) 니켈 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피 수지 제품 개요:

Ni 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피  (NTA)는 6FF 아가로스 배지에서 이미노디아세트산을 결합시킨 다음 Ni2+의 킬레이트 이온으로 작용합니다.  친화 크로마토그래피 매체 . 이것은 널리 사용됩니다  단백질의 가공 ,  핵산  그리고  폴리펩티드 정제  하류에서  생물약학 및 생물공학 .

니 세플라이프 ® 6FF (NTA) 니켈 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피 수지 수지 매개변수:

니 세플라이프 ® 6FF (NTA) 니켈 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피 수지 테스트 지침:

1. 컬럼 패킹
모든 재료와 시약을 실온으로 두고, 초기 완충액과 용출액을 준비한다.
2.평형
전도도, pH 및 기타 매개변수가 변하지 않을 때까지 초기 완충 용액의 2~5배 용량으로 균형을 맞춥니다.
3. 샘플 로딩
(1) 시료는 일반적으로 pH 6~8의 초기 완충액에 용해되며, 로딩 완충액의 pH를 높이면 로딩량을 늘릴 수 있다.
(2)완충액에는 EDTA, 시트르산 등이 함유되어서는 안 되며, 메르캅토에탄올, DTT 등의 환원제도 피하는 것이 좋다.
(3) 일반적으로 사용되는 완충용액은 10~100mmol/L 인산나트륨 완충용액, 20~200mmol/L Tris-HCl 완충용액이다.
(4) 일반적으로 이온교환을 제거하기 위해 완충액에 0.15~0.5 mol/L의 NaCl을 첨가한다.
(5)니켈 킬레이트 아가로스 젤을 처음으로 사용할 경우 초기 완충액으로 50 mmol/L PBS (50 mmol/L NaH2PO4, 0.5 mol/L NaCl, pH 7.4)를 사용하는 것이 좋습니다.
4. 용출
용출은 일반적으로 다음과 같은 방법으로 구분됩니다.
(1)pH 용출 감소: 대부분의 단백질은 pH 6-4(pH 3-4에서도)에서 용출되며 완충액은 아세트산나트륨, 구연산 및 인산완충액 시스템일 수 있습니다.
(2) 경쟁적 용출: 금속 이온과 친화성을 갖는 경쟁 물질의 농도를 선형적으로 증가시키거나 증가시키는 것 (예: 0~0.5 mol/L 이미다졸, 0~50 mmol/L 히스티딘, 0~2 mol/L NH4Cl).
(3)킬레이트제 용출: EDTA, EGTA와 같은 킬레이트제는 금속 이온과 반응하여 단백질을 용출시킬 수 있습니다. 그러나 이 방법은 서로 다른 단백질을 분리할 수 없고 단백질의 흡착에 영향을 미쳐 융합 단백질이 매달릴 수 없게 됩니다.
비고:
(1)처음 사용 시 용출에 필요한 이미다졸 농도가 불확실할 경우 초기 완충액에 10mmol/L, 20mmol/L, 50mmol/L, 100mmol/L, 200mmol/L, 500mmol/L을 첨가하는 것을 권장합니다. 이미다졸은 낮은 농도에서 높은 농도로 각각 용출 및 수집하였으며 용출 결과는 SDS-PAGE 전기영동으로 확인하였습니다.
(2)이미다졸은 알칼리성이므로 해당 완충액을 제조한 후 HCl로 pH를 조절한다.
(3) pH 용출을 낮추어 킬레이트제를 용출시키면 금속이온이 탈락하게 되므로 다음 사용 전에 금속이온을 재킬레이트 시켜주어야 한다.
(4)조건부로, 이미다졸 구배 선형 용출을 수행하여 선호하는 용출 조건을 결정할 수 있습니다.
위의 용출 방법의 경우, 이온 교환을 제거하기 위해 150~500 mmol/L의 NaCl을 완충액에 첨가해야 합니다.
5. 재생
(1) 반복 사용 후 또는 킬레이트된 금속 이온을 대체해야 할 때 겔은 니켈을 제거하고 재생해야 합니다. 니켈 제거 방법: 먼저 증류수 5~10배의 베드 볼륨으로 컬럼을 헹군 다음 100mmol/L EDTA 5~10배의 베드 볼륨으로 컬럼을 헹군 다음 마지막으로 0.5mol/L NaCl 2~3배의 베드 볼륨을 사용하여 잔류 EDTA를 씻어냅니다.
(2) 여러 번 사용된 컬럼은 일반적으로 니켈 제거 후 세척이 필요합니다. 세척 방법: 0.1~1.0 mol/L NaOH로 컬럼을 역세척하고 50 cm/h로 1~2시간 유지하면 강한 불순물을 제거할 수 있을 뿐만 아니라 열원도 제거할 수 있습니다.
(3) 세척 후 금속 이온 재킬레이트. 킬레이트 방법: 먼저 니켈 제거 후 컬럼을 2~5베드 볼륨의 증류수로 완전히 평형화한 다음 0.1~0.3mol/L 금속염 용액을 사용하여 5~10베드 볼륨을 통과시켜 금속 이온을 킬레이트합니다. 5~10베드 볼륨의 증류수로 헹구어 킬레이트되지 않은 금속 이온을 제거합니다.
6.CIP
(1) 이온교환에 의해 흡착된 단백질 제거 : 2~3 bed volume을 2 mol/L NaCl 용액으로 다시 세척하였다.
(2)강력한 소수성 단백질 및 지질 등의 제거 : 4개의 bed volume을 70% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 다시 세척하였다.
(3)침전단백질, 소수성단백질 제거 : 기준겔 재생단계.
7. 보관
밀봉하여 4~30℃(보관용액에 20% 에탄올 첨가)에서 건조하고 통풍이 잘되며 깨끗하고 동결시키지 않은 상태로 보관합니다. 사용된 컬럼은 4~8℃, 20% 에탄올 용액에 보관합니다.

주의:
(1)시료 및 Ni 분해수 ®6FF(NTA)는 용출 완충액으로 평형을 이룬 후 크로마토그래피 컬럼으로 이동해야 합니다.
(2)기둥 바닥은 평평해야 하며 홈이나 기포가 없어야 하며 그렇지 않은 경우 다시 설치해야 합니다.
(3) 사용시 컬럼과 버퍼의 온도가 같아야 컬럼 베드에서 기포가 발생하지 않고 정제효과에 영향을 미치지 않습니다.
(4) 용출과정에서는 유속을 엄격히 조절해야 하며 너무 빠르지 않도록 해야 한다.
(5)적재 및 전체 용출 과정 동안 실린더 표면이 건조되는 것을 방지합니다.