완충 용액

pH는 이온 교환 크로마토그래피 작동에 중요한 요소이며, pH 안정화 및 변화는 일반적으로 완충 용액을 사용하여 이루어지므로, 완충 용액의 선택은 분리에 영향을 미치는 중요한 요소입니다.

완충 용액을 선택할 때 pH와 이온 강도는 목표 생성물과 불순물의 분리뿐만 아니라 생성물 수율에도 영향을 미치는 두 가지 핵심 요소입니다. 선택하는 pH는 목표 생성물의 등전점, 안정성 및 용해도에 따라 달라지는데, 이는 분리된 물질이 이온 교환이 가능한 상태가 되도록 할 뿐만 아니라 높은 활성을 유지하기 위해서도 중요합니다. 이온 교환체의 pK 값 또한 고려해야 합니다.

완충재 자체가 전하를 띠고 있기 때문에, 그것은 또한 결합됩니다.  이온 교환 크로마토그래피 매질 이러한 조합은 두 가지 종류의 간섭을 일으킵니다. 첫째, 완충액의 농도를 감소시켜 완충 능력을 저하시킵니다. 둘째, 분리 매질과 교환되어 단백질과 매질의 교환 능력을 놓고 경쟁합니다. 따라서 음이온 교환 크로마토그래피 매질을 사용할 때는 인산염과 같은 음전하를 띤 완충액의 사용을 피해야 합니다. 양이온 교환 크로마토그래피 매질을 사용할 때는 트리스와 같은 양전하를 띤 완충액의 사용을 피해야 합니다.

분리 매체의 종류에 따라 초기 과정이 약간씩 다릅니다. 일반적으로 음이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용할 경우, 초기 완충액은 목표 단백질의 등전점보다 0.5~1 pH 높게 설정합니다. 양이온 교환 매체를 사용할 경우에는 초기 완충액이 목표 단백질의 등전점보다 0.5~1 pH 낮게 설정합니다.