니 셉라이프 ®6FF(IDA) 친화성 크로마토그래피 미디어

니켈 킬레이트화 아가로스 크로마토그래피 수지

Ni Seplife 6FF(IDA) 지침

니 셉라이프 ® 6FF(IDA) 친화성 크로마토그래피 미디어 제품 프로필:

Ni 킬레이팅 아가로스 크로마토그래피  (IDA)는 6FF 아가로스 배지에 이미노디아세트산을 결합시킨 후 Ni2+ 이온을 킬레이트화하여  친화성 크로마토그래피 매체 . 그것은 널리 사용됩니다  단백질 가공 ,  핵산  그리고  폴리펩티드 정제  다운스트림에서  바이오제약 및 생명공학 .

니 셉라이프 ® 6FF(IDA) 친화성 크로마토그래피 매질 수지 매개변수:

니 셉라이프 ® 6FF(IDA) 친화성 크로마토그래피 미디어 테스트 지침:

1. 컬럼 포장
(1) 모든 물질과 시약을 실온에서 초기 완충액과 용출을 준비합니다.
(2) 컬럼 크기에 따라 레진 샘플을 채취하고 20% 에탄올을 씻어 건조시킨 후 버퍼(레진:버퍼 비율 = 3:1)를 사용하여 균질화 및 탈기 처리합니다.
(3) 물 또는 완충액을 사용하여 컬럼 내부 또는 바닥을 젖게 유지하십시오. 물 또는 완충액 수준은 필터 막보다 높아야 하며 컬럼 바닥에 흔들림이 없는지 확인하십시오.
(4) 거품이 생기지 않도록 유리 막대를 사용하여 컬럼의 내부면을 따라 균질액을 컬럼으로 한 번 안내합니다. 컬럼 배출 밸브를 열어 레진이 자유롭게 세팅되도록 하고 컬럼 상단 캡을 잘 연결합니다.
(5) 연동 펌프를 열고 버퍼를 사용하여 일반 사용 버퍼 유속보다 1.33배의 유속으로 컬럼을 통과시킵니다. 컬럼 밸런스를 맞추려면 2-3BV 버퍼를 사용하십시오.
2.평형
전도도, pH 및 기타 매개변수가 변하지 않을 때까지 초기 완충 용액의 2~5층 부피로 균형을 맞춥니다.
3.샘플 로딩
(1) 시료는 일반적으로 pH 6~8의 초기 완충액에 용해되며, 로딩 완충액의 pH를 높이면 로딩량이 증가할 수 있습니다.
(2) 완충액에는 EDTA 및 구연산염이 포함되어서는 안되며, 메르캅토에탄올, DTT 등의 환원제는 피하는 것이 가장 좋습니다.
(3) 일반적으로 사용되는 완충액에는 10~100mmol/L 인산나트륨 완충액, 20~200mmol/LTris-HCl 완충액이 있습니다.
(4) 이온 교환을 제거하기 위해 일반적으로 0.15 ~ 0.5 mol/L의 NaCl을 완충액에 첨가합니다.
(5)니켈 킬레이트 아가로스 겔을 처음 사용하는 경우 초기 완충액으로 50mmol/L PBS(50mmol/L NaH2PO4, 0.5mol/L NaCl, pH 7.4)를 사용하는 것이 좋습니다.
4.용출
Elution은 일반적으로 다음과 같은 방법으로 구분됩니다.
(1) pH 용출 감소: 대부분의 단백질은 pH 6-4(pH 3-4에서도)에서 용출되며 완충제는 아세트산나트륨, 구연산 및 인산염 완충 시스템일 수 있습니다.
(2) 경쟁적 용리: 금속 이온에 친화력을 갖는 경쟁 물질(예: 0-0.5 mol/L 이미다졸, 0-50 mmol/L 히스티딘, 0-2 mol/L NH4Cl)의 농도를 선형적으로 증가시키거나 증가시킵니다.
(3) 킬레이트제 용출: EDTA 및 EGTA와 같은 킬레이트제는 금속 이온과 반응하여 단백질이 용출될 수 있습니다. 그러나 이 방법은 서로 다른 단백질을 분리할 수 없고, 단백질의 흡착에 영향을 미쳐 융합 단백질이 매달리지 못하는 문제가 있다.

니 셉라이프 ® 6FF(IDA) 친화성 크로마토그래피 미디어 비고:

(1)처음 사용 시 용출에 필요한 이미다졸의 농도가 불확실한 경우에는 10mmol/L, 20mmol/L, 50mmol/L, 100mmol/L, 200mmol/L, 500mmol/L을 첨가하는 것이 좋습니다. 초기 버퍼. 이미다졸을 각각 낮은 것부터 높은 것까지 용출하여 수집하였고, 용출된 결과를 SDS-PAGE 전기영동으로 확인하였다.
(2) 이미다졸은 알칼리성이며 해당 완충액을 준비한 후 HCl로 pH를 조정합니다.
(3) pH 용출을 낮추고 킬레이트제를 용출하면 금속 이온이 떨어져 나가므로 다음 사용 전에 금속 이온을 다시 킬레이트해야 합니다.
(4)조건부로 이미다졸 기울기 선형 용출을 수행하여 바람직한 용출 조건을 결정할 수 있습니다.
위의 용출 방법에서는 이온 교환을 제거하기 위해 완충액에 150~500mmol/L의 NaCl을 첨가해야 합니다.
5.재생
(1) 반복 사용 후 또는 킬레이트화된 금속 이온을 교체해야 하는 경우 젤을 제거하고 재생해야 합니다. 니켈 제거 방법: 먼저 5~10층 부피의 증류수로 컬럼을 헹구고, 그런 다음 100mmol/L EDTA의 5~10층 부피로 컬럼을 헹구고, 마지막으로 0.5mol/L NaCl 세척액의 2~3층 부피를 사용합니다. 잔류 EDTA를 제거합니다.
(2) 여러 번 사용되는 컬럼은 일반적으로 니켈 제거 후 청소가 필요합니다. 세척 방법: 0.1~1.0 mol/L NaOH로 컬럼을 뒤집고 50 cm/h로 1~2시간 동안 유지하면 강한 불순물을 제거할 수 있을 뿐만 아니라 열원도 제거할 수 있습니다.
(3) 세척 후 금속 이온을 다시 킬레이트화합니다. 킬레이트화 방법: 먼저 니켈 제거 후 컬럼을 2~5층 부피의 증류수로 완전히 평형화한 다음, 0.1~0.3mol/L 금속염 용액을 사용하여 5~10층 부피를 통과시켜 금속 이온을 킬레이트화합니다. 킬레이트화되지 않은 금속 이온을 제거하려면 5~10배의 증류수로 헹구십시오.
6.CIP
(1) 이온 교환에 의해 흡착된 단백질 제거: 2~3층 부피를 2mol/L NaCl 용액으로 다시 세척했습니다.
(2)강한 소수성 단백질 및 지질 등의 제거: 4층 부피를 70% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 세척했습니다.
(3)침전된 단백질, 소수성 단백질 제거: 참조 겔 재생 단계.
7. 보관
밀봉하여 4~30°C(저장 용액 중 20% 에탄올)에서 건조하고 통풍이 잘 되며 깨끗하고 얼지 않은 상태로 보관합니다. 사용한 컬럼은 4~8℃, 20% 에탄올 용액에 보관한다.

주의:
(1) 시료 및 Ni 세포막 ®6FF(IDA)는 용출 완충액으로 평형을 이루고 크로마토그래피 컬럼으로 이동해야 합니다.
(2) 컬럼 베드는 평평해야 하며 홈이나 기포가 없어야 합니다. 그렇지 않으면 다시 설치해야 합니다.
(3) 사용시 컬럼과 완충액의 온도가 동일한 지 확인하여 컬럼 베드에 기포가 발생하고 정제 효과에 영향을 미치지 않도록하십시오.
(4) 용출 과정에서 유속은 엄격하게 제어되어야 하며 너무 빠르지 않아야 합니다.
(5) 로딩 및 용출 전 과정에서 실린더 표면이 건조되는 것을 방지합니다.