완충액

이온교환 크로마토그래피의 작동에 있어 pH는 중요한 요소이며 pH의 안정화 및 변화는 대개 완충액을 사용하여 이루어지기 때문에 완충액의 선택은 분리에 영향을 미치는 중요한 요소입니다.

완충액을 선택할 때 pH와 이온 강도는 목적 생성물과 불순물의 분리뿐만 아니라 생성물의 수율에도 영향을 미치는 두 가지 핵심 요소입니다. 선택된 pH는 분리된 물질을 교환 가능한 이온으로 만들 뿐만 아니라 높은 활성을 유지하기 위해 대상 생성물의 등전점, 안정성 및 용해도에 따라 달라집니다. 이온 교환기의 pK 값도 고려해야 합니다.

버퍼 자체가 충전되기 때문에 버퍼와도 결합됩니다.  이온 교환 크로마토그래피 매질 . 이 조합은 한편으로는 두 가지 종류의 간섭을 유발하여 버퍼의 농도를 감소시켜 버퍼링 용량을 감소시킵니다. 반면에 분리 매체와 교환되어 매체의 교환 용량을 놓고 단백질과 경쟁합니다. 따라서 음이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용할 때 인산염과 같은 음전하를 띤 완충액을 사용하지 마십시오. 양이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용하는 경우 Tris와 같은 양전하를 띤 완충액을 사용하지 마십시오.

다양한 유형의 분리 매체로 인해 초기 프로세스가 약간 다릅니다. 정상적인 상황에서 음이온 교환 크로마토그래피 매체를 사용할 때 초기 완충액은 표적 단백질의 등전점보다 0.5-1 pH 높습니다. 양이온교환층을 이용하여 배지를 분석할 때, 출발 완충액은 목적 단백질의 등전점보다 0.5~1 pH 정도 낮다.