용출 및 재생

크로마토그래피 매체가 소진되면 용출되어야 합니다. 기본 원리는 보다 활성이 높은 이온 또는 그룹에 의해 대상 생성물을 탈착시키는 것입니다. 흡착제마다 활성이 다릅니다. 따라서, 단백질을 용출시키기 위해서는 적합한 용리액을 선택해야 합니다.  크로마토그래피 매체 .

이온 교환 크로마토그래피를 용출하는 방법에는 대략 세 가지가 있습니다.
하나는 동시 용리용입니다. 용리액은 묽은 산, 알칼리 또는 염용액을 사용할 수 있으며, 적절한 유기용매도 사용할 수 있으며, 이때 염용액을 주로 사용하며 목적의약품 및 최종제품의 성질에 따른 제형은 다음과 같다. 선택된. 흡수되는 물질은 단일 종이 아닌 경우가 많기 때문에 각 물질의 전하가 다르며 매질에 대한 결합력도 다릅니다. 동일한 용리액을 사용하더라도 쉽게 교체되는 물질이 먼저 배지 밖으로 흘러나와 결합력이 강합니다. 물질이 배출된 후 분별을 통해 수집하면 다양한 물질을 분리하여 비교적 순수한 제품을 얻을 수 있습니다. 이 방법은 목적산물의 성능이 잘 파악된 경우의 분리나 분석종의 분리에 자주 사용됩니다.

두 번째는 단계적 용출, 즉 다양한 농도의 염 용액을 사용한 용출입니다. 분리 매체 교환 흡착 과정에서는 다양한 단백질이 흡착됩니다. 일정한 용출 조건을 사용하면 모든 성분을 제대로 분리할 수 없는 경우가 있어 용출 조건을 변경해야 하는 경우도 있습니다. 단계적 변화일 수 있습니다. 즉, 단계적으로 용리를 위해 서로 다른 pH 값을 갖는 서로 다른 용리액 또는 용리액을 사용하고, 서로 다른 용리액 농도와 서로 다른 산도에 따라 서로 다른 용리 피크를 얻을 수 있습니다. 즉, 염 농도에 따라 목적 단백질을 얻을 수 있고, 염 농도에 따라 목적 단백질이 다를 수 있다. 이 단계별 용리 방법은 알려진 성질의 단백질 분리, 특히 대규모 생산에 적합하며 작동 및 제어가 쉽습니다.

세 번째 유형은 연속 구배 용출, 즉 용리액 등급화 과정에서 일정한 선형 변화에 따라 용출액의 이온 강도나 pH가 변화하는 방식(일반적으로 pH를 변화시키는 용출 방식을 사용하는 특별한 경우에만 해당)입니다. 이 과정에서 서로 다른 단백질이 하나씩 교체되어 다양한 단백질 성분을 얻으며 동시에 단백질은 일반적으로 꼬리가 붙지 않습니다. Gradient elution은 이온교환 크로마토그래피에서 가장 일반적으로 사용되는 용리법이며, 가장 강력한 용리능력을 지닌 용리법이기도 하며, 유사한 전하 특성을 지닌 유사한 성분의 용출에 적합합니다.

용출 과정에서는 병류 용출 또는 역류 용출을 사용할 수 있습니다. 병류 용출은 정방향 용리라고도 하며, 즉 용리액의 흐름 방향이 작동 유체의 흐름 방향과 동일하며 역류 용리라고도 합니다. 역류 용리는 용리액의 흐름 방향이 반대입니다. 작동유체의 흐름방향으로. 교환탑을 통해 공급액이 위에서 아래로 교환 흡착되면 교환탑 상층의 흡착질 농도가 하층의 흡착질 농도보다 높고, 용출액은 교환탑에서 역탈착된다. 아래에서 위로 용출 목적을 보다 효율적으로 달성할 수 있습니다. 그러나 역방향 용출 작업은 정방향 용출에 비해 훨씬 복잡하기 때문에 대부분 양성 용출을 기반으로 합니다.

용리액의 유속도 이온교환 크로마토그래피의 분리에 영향을 미치며 일반적으로 용리속도는 일정하게 유지됩니다. 일반적으로 Slow Elution의 분리능은 Fast Elution의 분해능보다 우수하지만, Elution 속도가 너무 느려 분리 시간이 길어지고 시료 확산, 스펙트럼 피크 확장, 분리능 감소 등의 부작용이 발생하므로 이에 따라 달라집니다. 실제 상황에. 적절한 용출 속도를 선택합니다. 용리 피크가 특정 영역에 상대적으로 집중되어 중복이 발생하는 경우 기울기 범위를 적절하게 줄이거나 용리 속도를 낮추어 분리능을 높여야 합니다. 분리능은 좋지만 용출 피크가 너무 넓은 경우에는 용출 속도를 적절하게 높여야 합니다.